CONSIDERATII GENERALE

Aminoacizii sunt substante organice, naturale sau de sinteza, continand, fara exceptie, gruparile amino - si carboxil -, uneori si alte grupari functionale in molecula. Sunt substante solide, incolore , multi dintre ei solubili in apa, altii mai putin sau greu solubili. Cu exceptia proteinei aminoacizii sunt putin solubili in alcool ti insolubili sau greu solubili in solventi nepolari. y8x19xt
Avand pe molecula grupe amino - si carboxil care disociaza in mediu apos, aminoacizii formeaza amfioni, la anumite valori de pH numite punct izoelectric (pHi); la valori pH diferite de pHi moleculele lor capata o sarcina electrica neta, manifestand proprietati electroforetice. Aminoacizii reactioneaza atat cu acizii cat si cu bazele - proprietati amfotere- si pot functiona ca sisteme tampon.
Datorita gruparilor amino - si carboxil - cat si a altor grupari din molecula, aminoacizii prezinta o serie de reactii generale insa si unele reactii particulare care stau la baza multor metode de identificare si dozare a lor.

REACTII GENERALE

REACTIA CU NINHIDRINA

Aminoacizii reactioneaza cu ninhidrina la pH 4-8 formand compusi colorati in albastru-violet.
Intr-o prima etapa a reactiei ninhidrina reactioneaza ca oxidant, reducandu-se la hidrindantina, iar aminoacidul format sufera o reactie de hidroliza, urmata de o decarboxilare. In etapa urmatoare hidrindantina reactioneaza cu o molecula de ninhidrina si amoniacul eliberat din reactia de hidroliza a aminoacidului, conducand la un produs de condensare colorat caracteristic.
Aceasta reactie fiind foarte sensibila este utilizata in metodele de identificare si dozare ale aminoacizilor.
Reactivi: solutii de aminoacizi 0,1%, solutie de ninhidrina 0,2% in etanol.

MODUL DE LUCRU

Intr-o eprubeta se introduce 1 ml solutie de aminoacid si se aduce la pH neutru. Se adauga 5 picaturi din solutia de ninhidrina dupa care se incalzeste 2 minute pe o baie de apa adusa la fierbere. In conditiile reactiei se observa o coloratie in galben.

REACTIA CU ACIDUL AZOTOS

Ca si aminele primare alifatice, aminoacizii reactioneaza cu acidul azotos eliberand azot molecular. Reactia are loc cu randament practic cantitativ, la un mol de aminoacid degajandu-se un mol de azot. Aceasta reactie permite dozarea azotului aminic din aminoacizii cu gruparea amino- libera.
Reactivi: aminoacizi, solutie de azotit de sodiu 10%, solutie de acid clorhidric 2M.
MODUL DE LUCRU

Se iau 2 eprubete curate, iar in prima se introduc 0,5 g dintr-un aminoacid si 2 ml acid clorhidric 2M. In a II a eprubeta se introduc 2 ml acid clorhidric de aceeasi concentratie, fara a introduce aminoacid, Continutul eprubetelor se trateaza cu 1 ml azotit de sodiu 10%, prin picurare, dupa o racire prealabila in baie de gheata. Se urmareste degajarea azotului.

REACTII SPECIFICE

REACTIA XANTOPROTEICA

Aminoacizii care contin in molecula radicali aromatici reactioneaza cu acidul azotic concentrat, la incalzire, formand nitroderivati de culoare galbena.
Reactivi: tirozina sub forma de solutie apoasa 0,5%, acid azotic concentrat, solutie de amoniac sau hidroxid de sodiu 20 %.

MODUL DE LUCRU

intr-o eprubeta continand 1 ml solutie tirozina se adauga prin prelingere 1 ml acid azotic concentrat. Se incalzeste usor pe o baie de apa adusa la fierbere, timp de 1 minut, apoi se raceste. In eprubetele care contin aminoacid cu caracter aromatic se observa o coloratie galbena. Dupa racire si alcalinizare cu hidroxid de sodiu sau amoniac, culoarea trece in portocaliu.

REACTIA CU ACID GLICOXILIC

Triptofanul reactioneaza prin restul indolic cu cu acid glioxilic in prezenta acidului sulfuric concentrat, conducand la un compus colorat violet. Reactia poate avea loc si cu acid acetic glacial, care dupa expunere la lumina contine acid glioxilic.
Reactivi: Aminoacizi (triptofan, tirozina, glicina) sub forma de solutie 0,1%, acid acetic glacial, acid sulfuric concentrat.
MODUL DE LUCRU

Peste 2 ml solutie triptofan se adauga 2 ml acid acetic glacial. In solutia formata se introduc 2 ml acid sulfuric concentrat prin prelingere inceata pe peretele interior al eprubetei, fara agitare. La limita de separatie dintre cele 2 straturi apare un inel violet caracteristic.

REACTIA PAULY

Tirozina si histidina dau reactii de cuplare cu acidul sulfanilic diazotat, formand compusi colorati in rosu.
Reactanti: aminoacizi (turozina, histidina, triptofan, glicina) sub forma de solutie 0,1%, solutie de acid sulfanilic 1% in acid clorhidric 0,1M, solutie de azotit de sodiu 5%, solutie carbonat de sodiu 1%.

MODUL DE LUCRU

Un amestec format din 2 ml. solutie aminoacid si 1 ml solutie acid sulfanilic (in HCl) racit intr-o baie de gheata, se trateaza la rece cu 1 ml solutie azotit de sodiu. Dupa 2-3 min continutul eprubetei se alcalinizeaza cu 2 ml solutie carbonat de sodiu. Reactia este pozitiva pentru tirozina si histidina (coloratie rosie).

DETERMINAREA AZOTULUI AMINIC PRIN TITRARE CU FORMOL

Aminoacizii adopta in solutii apoase structura amfionica, deci se comporta ca acizi (donori de protoni) sau ca baze (acceptori de protoni).
Titrarea aminoacizilor cu hidroxid de sodiu se face in prezenta aldehidei formice luata in exces, reactionand cu gruparea amino libera.
Aciditatea mediului care apare in urma acestui proces poate fi titrata cu hidroxid de sodiu in prezenta fenolftaleinei, datorita faptului ca valoarea pH a punctului final de titrare este micsorata.
Reactivi: solutia aminoacidului de analizat cunoscut avand concentratia pe domeniul 0,07-0,13 M, solutie de hidroxid de sodiu 0,1N cu factor cunoscut, solutie de fenolftaleina 15 in etanol 96%, solutie formaldehida 40%.

MODUL DE LUCRU

Intr-un pahar Erlenmeyer de 150 ml se introduc 10 ml formaldehida 40%, 20 ml apa, 2-3 picaturi solutie de fenolftaleina si se adauga dintr-o biureta hidroxid de sodiu 0,1 N, incet, prin picurare, pana cand apare o coloratie roz persistenta. Cantitatea de hidroxid de sodiu utilizata in aceasta operatie fiind necesara pentru neutralizarea acidului formic continut in solutia de aldehida formica, nu se va lua in calcul. Intr-un alt pahar Erlenmeyer de 150 ml se introduc 25 ml solutie aminoacid, 2-3 picaturi solutie fenolftaleina si se adauga incet, cu picatura, hidroxid de sodiu 0,1 N dintr-o biureta pana cand apare o coloratie roz persistenta. In acest stadiu, peste continutul paharului se adauga solutia de formalehida neutralizata anterior. Culoarea roz dispare. Se titreaza solutia incolora obtinuta, cu hidroxid de sodiu 0,1 N, pana la reaparitia culorii roz persistenta, caracteristica domeniului de viraj al fenolftaleinei. Se citeste volumul de hidroxid de sodiu 0,1 N cu care s-a facut titrarea.
14 aVaFaM= mg N2 in 25 ml solutie aminoacid
V= volumul solutiei de NaOH 0,1N consumat
F= factorul solutiei de NaOH 0,1N
M= molaritatea solutiei NaOH cu care s-a facut titrarea